做ELISA实验结果总是不满意？看看是不是你中招了！

       做ELISA实验结果总是不满意？看看是不是这几个点没注意到....

Q1：为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作？

上海轩泽康生物技术解析：温度是ELISA结合反应的重要影响因素，为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温。包括检测样本，避免因温度的动力学反应导致ELISA检测结果的不准确。

Q2：ELISA实验为什么必须设置复孔？

上海轩泽康生物技术解析：复孔检测可以计算平均值，确保实验结果更加准确；同时还能解决实验中误操作造成的跳孔现象；计算CV值，可以对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。

Q3：为什么实验过程中孵育洗涤需要振荡？如何振荡？

上海轩泽康生物技术解析：孵育过程振荡可以加快、加强抗原抗体分子间的相互碰撞接触，使得反应过程更加完全。OD值通常会比未振荡孵育的结果要高。洗涤过程振荡可以使洗板更干净，在很大程度上能降低背景值。同时可以提高试剂盒检测的灵敏度。

        ELISA检测原理：向预先包被有目标物检测因子捕获抗体的微孔中，加入待检测的样本、标准品、生物素标记的检测抗体、HRP酶结合物，经过温育和洗涤，用底物TMB显色，TMB在酶的作用下转化为蓝色，并在酸的作用下最终转化为黄色。颜色的深浅与样本中目标检测因子呈正相关，用酶标仪在450nm下测定吸光度，即可根据标曲计算样品中目标检测因子的浓度。