人抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）

ELISA检测试剂盒使用说明书

                                                                                                             产品货号：XZK-2761

【摘要】：抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-Resistant Acid Phosphatase，TRAP）是一种在酸性环境下（最适pH为4.9-6.0）具有活性，且能抵抗酒石酸抑制的酸性磷酸酶同工酶。主要由破骨细胞分泌，是破骨细胞的标志性酶。此外，它也存在于巨噬细胞、Gaucher细胞、红细胞、血小板、脾脏毛状细胞及单核吞噬细胞中，但在肺泡巨噬细胞和破骨细胞中含量最丰富。

【产品用途】：本试剂盒设计用于定量检测血清、血浆、组织匀浆、细胞上清、细胞裂解物等样本中的TRAP活性，仅供研究使用，不得用于医学诊断。

【检测原理】：试剂盒采用双抗体夹心法原理：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及校准品中待测物，加入辣根过氧化物酶标记的酶标二抗，结合形成“抗体-抗原-抗体-HRP”免疫复合物，加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中待测物的浓度。

【需自备的设备及试剂】：

1）含450nm波长滤光片的酶标仪

2）移液器、多通道移液器及配套枪头

3）能提供37°C ± 0.5°C环境的恒温箱

4）双蒸水或去离子水

5）洗瓶或自动洗板机

6）各种规格离心管

7）吸水纸或抽纸

8）计时器

【样品处理建议】：

*待检测样品必须澄清，没有严重溶血和过多的脂肪。

【血清】：新取全血，室温静止，自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

【血浆】：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

【尿液】：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

【细胞培养上清】：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

【组织标本】：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

*注意事项：

1.     新取全血不可剧烈摇晃，或者过高转速离心，避免溶血。

2.     标本采集后尽早进行提取，提取按相关文件进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3.     不能检测含叠氮钠（NaN3）的样品，因叠氮钠抑制辣根过氧化物酶的活性。