植物木葡聚糖内糖基转酶水解酶（XTH）

ELISA检测试剂盒说明书

                                                                                                             产品货号：XZK-15813

【摘要】：木葡聚糖内糖基转移酶/水解酶是一类广泛存在于植物中的细胞壁修饰酶，属于糖苷水解酶家族GH16，通过催化木葡聚糖链间的转糖基反应或水解反应，动态调节植物细胞壁的结构与功能，在植物生长发育、逆境响应及果实成熟等过程中发挥关键作用。

【产品用途】：本试剂盒设计用于检测植物样本中的XTH，仅供研究使用，不得用于医学诊断。

【检测原理】：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被木葡聚糖内糖基转酶水解酶（XTH）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的木葡聚糖内糖基转酶水解酶（XTH）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。

【需自备的设备及试剂】：

1）含450nm波长滤光片的酶标仪

2）移液器、多通道移液器及配套枪头

3）能提供37°C ± 0.5°C环境的恒温箱

4）双蒸水或去离子水

5）洗瓶或自动洗板机

6）各种规格离心管

7）吸水纸或抽纸

8）计时器

样品收集、处理及保存方法：

1.  样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2.  标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。

3.  植物萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测。

4.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

植物预处理方案：

1、 新鲜植物组织请在液氮中充分研磨，如无液氮，剪碎，玻璃匀浆器研磨也可；

2、 加入样品体积9倍（鲜重：匀浆液体积）的提取液（0.1mmol PH7.4 PBS ）, 4℃浸提2h；

3、 请于4℃ ，3000rpm，离心10min，收集上清；

4、 取上清检测。 

注：标本均应密封保存，短期内使用（1周左右），可4度保存；若样本收集与实验时间相隔较长，务必保存在-20或-80度，尽量不要超过半年，同时避免反复冻融。

植物木葡聚糖内糖基转酶水解酶（XTH）ELISA检测试剂盒性能：

1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.  灵敏度：最低检测浓度小于1.0 U/mL。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6个月