人5α还原酶（5AR）ELISA 检测试剂盒使用手册 

                                                                       产品货号：XZK-369

【摘要】：5α-还原酶(5AR)是依赖还原型辅酶Ⅱ( N ADPH)的膜蛋白酶，其功能为催化 睾酮(T)转化为二氢睾酮( DHT) ，当 DHT 在前列腺和皮肤内积累到高水平后 会引起许多病理变化，5α-还原酶有Ⅰ型和Ⅱ型两种同功酶，Ⅰ型酶主要分 布于皮肤，Ⅱ 型酶主要分布于前列腺体。

【产品用途】：本试剂盒仅供科研使用，定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中的5AR。凡订购我司任意一款试剂盒均享受免费代测服务，欢迎咨询、订购！

样本处理及要求：

【血清】：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

【血浆】：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

【组织匀浆】：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

【细胞培养物上清】：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

【其它生物标本】：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

【样品外观】：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

【样品保存】：样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

人5α还原酶（5AR）ELISA 检测试剂盒组成及其配置（检测范围请参考说明书）：

技术小提示：

1.      当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.      为了避免交叉感染，配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。

3.      每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.      混合后的显色底物在上板前应为无色，请避光保存；假如微孔板后，将由物色变成不同深度的蓝色。

5.      终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致；加入终止液后，孔内颜色由蓝变黄；若孔内有绿色，则表明孔内液体未混匀；请充分混合。